酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。檢測單位用 OD 值表示，OD 是 optical delnsity（光密度）的縮寫，OD＝1og（1/trans），其中 trans 為檢測物的透光值。根據蘭伯—比爾定律，OD值與光強度成下述關系：E＝OD=logΙ0/Ι，其中：E 表示被吸收的光密度；Ι0 為在檢測物之前的光強度；Ι 為從被檢測物出來的光強度。OD 值由下述公式計算：E＝OD=C×D×E 其中：C 為檢測物的濃度；D 為檢測物的厚度；E 為摩爾因子。

酶標儀：即酶聯免疫檢測儀（ELISA Reader）是酶聯免疫吸附試驗的儀器?？珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣觾纱箢?，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計，即用比色法來分析抗原或抗體的含量。ELISA 測定一般要求測試液的終體積在250ul 以下，用一般光電比色計無法完成測試。因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。

ELISA 實驗原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生物素化的抗體，HRP 標記的親和素，經過*洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標蛋白呈正相關。用酶標儀在（450nm）波長下測定測定吸光度，計算樣品濃度。

1.1 酶標儀測糧食中的黃曲霉毒素含量儀器、試劑①美國熱電 MK3 型酶標儀；賽多利斯電子天平（感量 0.1 克）；50 微升移液器及配套吸頭；恒溫培養箱（0℃-50℃）；冰箱（4℃-8℃）；玻璃器皿：錐形瓶，燒杯，分液漏斗，蒸發皿，量筒，具塞試管，滴管，移液管；濾紙等。②黃曲霉毒素 Bl 酶聯免疫定量測試盒；石油醚；甲醇；蒸餾水。

1.2實驗步驟

1.2.1樣品處理方法：稱5.0g樣品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中。準確加入 25.0ml 甲醇水（1+1）溶液，加塞振搖 15min，棄去 1/4初濾液，收集試樣濾液，此液為樣品提取液。假設樣品不需稀釋，此液則為待測樣液。

1.2.2試劑的配制①每瓶C試劑（酶標抗原）中準確加入1.5mlD試劑(酶標抗原稀釋液)，充分溶解，配成實驗用酶標抗原溶液，2℃——8℃保存。②取適量 E 試劑（濃縮洗滌液）用蒸餾水稀釋 20 倍待用。

1.2.3操作流程：樣品提取，適當稀釋，試劑準備，加樣，在溫度37℃下進行免疫反應30min，然后在37℃下進行顯色反應15min，結果判定，計算含量。

2 結果計算

建立公式：X（ng/g）=C×VM×D式中：X：黃曲霉毒素B1含量（ng/g）；C：待測樣液中黃曲霉毒素Bl含量（ng/m1）；V：樣品提取液體積（m1）；M：樣品質量（g）；D：樣品稀釋倍數。

3 酶標儀的使用注意事項

3.1 工作環境 酶標儀是一種精密的光學儀器，因此良好的工作環境不僅能確保其準確性和穩定性，還能夠延長其使用壽命。

①儀器應放置在無磁場和干擾電壓的位置。

②儀器應放置在低于 40 分貝的環境下。

③為延緩光學部件的老化，應避免陽光直射。

④操作時環境溫度應在 15℃——40℃之間，環境濕度在 15％——85％之間。

⑤操作電壓應保持穩定。

⑥操作環境空氣清潔，避免水汽，煙塵。保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及足夠的操作空間。

3.2 操作注意事項 酶標儀的功能是用來讀取酶聯免疫試劑盒的反應結果，因此要得到準確結果，試劑盒的使用必須規范。在酶標儀的操作中應注意以下事項：①使用移液器加液，移液頭不能混用。②洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機洗板，避免交叉污染。③嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應時間準確。④請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部，操作完成后請洗手。⑤如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學害，請嚴格按照試劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害。⑥不要在測量過程中關閉電源。⑦對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差，應根據實際情況及時修改參數，以達到佳效果。⑧使用后蓋好防塵罩。

3.3 閾值可疑范圍的設定 一般酶標儀閾值矩陣設定可設定陰性、可疑、陽性 3 個范圍。有經驗表明可疑范圍的設定要設定為臨界上下15%（也稱灰色區）為宜；同時陰性范圍下限和陽性范圍應該充分考慮到影響 ELISA 結果因素的存在，可疑范圍上限必須考慮到雙波長情況下出現負吸光度值和超范圍報告影響結果的可能性。“灰色區”的結果的真實性是 ELISA 定性測定中需要把握的環節，也是實驗室引起醫療糾紛的主要方面，因此必須對可疑結果進行復檢，用兩種試劑盒。

3.4 樣本名字文件設定 由于部分試驗的所測樣本不一定是連續，樣本命名顯得尤為重要。同時應做到樣本名字文件與吸光度值文件保持一致，這樣若以后再調出吸光度文件時，樣本名字文件可自動同時調出；若大批量樣本時應對不同微孔板編號區別（以文件后綴形式）。

3.5 樣板程序文件設定 一個實驗室同一試驗可能使用不同廠家試劑盒，但不同試劑盒規定的設定對照數量、閾值判定標準等均可能不一致，酶標儀所設樣板程序也不一致。為了使用方便，可在樣板程序文件中用后綴加以區別。

3.6記錄管理 隨著我國法律的不斷完善，人們的法制觀念不斷增強，建立健全原始記錄十分重要和必要。原始記錄不僅是儀器打印出來的數據，還應記錄試劑盒廠家、批號、效期、質控物來源、批號、效期、檢測者、復核者等相關內容，同時可用原始記錄進行資料分析，更好地開展工作。但要注意的是原始記錄不宜保存在電腦內，應打印后裝訂保存。