(一)先將過量的特異抗體（或抗原）包被于載體（酶標板）上，通過抗原抗體反應使待側物質（抗原或抗體）和酶標記物（用HRP-辣根過氧化物酶標記的抗體或抗原）也結合在載體上（固相分離），經洗滌去除游離的酶標記物后，加入底物，已經結合在載體上的標記酶促使底物顯色。終利用光電比色法，對待測物進行定性判斷或定量測定。以上方法的檢驗靈敏度可以達到ng/ml水平。

（二）包被酶標板：將特異抗原溶液加入酶標板孔內，4℃過夜。然后用洗滌液洗滌3次到5次（洗板機洗板），這樣溶液中的特異抗原被牢固吸附在酶標板的微孔表面，形成固相抗原，殘液及雜質被清洗掉。

（三）加入被測樣本液（病人血清）：樣本液中若含有待測抗體，經過溫育反應，則與已包被的抗原產生特異結合，生成包被抗原與待測抗體的復合物，被吸附在酶標板的微孔表面。然后再次進行洗滌，去除殘液及干擾物質。

（四）加酶結合物：經過溫育反應，生成包被抗原加待測抗體加酶標抗原的三者復合物，同樣被吸附在微孔表面，然后再次洗滌，去除游離的或非特異沾附的酶結合物（洗板）。

（五）加顯色液：經過10分鐘到20分鐘的顯色反應，被吸附的復合物中的酶與顯色底物液生成有色溶液。此時，由于游離或非特異吸附的酶已被清除，所以溶液顏色的深淺，僅決定于已與待測物結合的酶的量，因此能真實反映待測物的濃度。被固化的酶越多，顯色就會越深，這就說明待測物的濃度越大。

（六）加終止液：終止顯色反應。

使用酶標儀檢驗：把完成顯色的酶標板放在酶標儀儀器上進行光電比色檢驗，儀器分別檢測空白孔、陰陽性對照孔、標準孔、質控孔和患者樣本孔的吸光度值，并自動按程序要求計算出患者樣本中待測物的濃度或進行定性分析。